现场检测AbSV仅需2小时灵敏性提高至少百倍沙梨

现场检测AbSV仅需2小时灵敏性提高至少百倍

鲍肌肉萎缩症病毒（Abalone Shriveling Syndrome-associated Virus，AbSV）能够引起鲍肌肉萎缩症。AbSV传染性强，可感染各种规格杂色鲍。AbSV病来势凶猛，从症状出现到全部死亡通常只需要3天，该病现已蔓延至广东、广西、海南和台湾等省区，并在1999年至2005年间每逢冬季、春季反复暴发，对我国南方杂色鲍养殖业造成了毁灭性打击。

由中国水产科学研究院南海水产研究所渔业生物病害防治研究室姜敬哲副研究员主持研发的鲍肌肉萎缩症病毒核酸检测试剂盒，与传统的PCR检测方法相比，能够更快速、更灵敏、更简便地检测出AbSV，为及时防治鲍肌肉萎缩症提供参考依据。

试剂盒灵敏性比普通PCR高100倍~1000倍

姜敬哲介绍说，鲍肌肉萎缩症病毒核酸检测试剂盒主要运用了环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification, LAMP），这是一种新颖的恒温核酸扩增方法。与传统PCR技术相比，该试剂盒对仪器的要求低，PCR技术需要严格控制升温降温、价格昂贵的PCR仪，而试剂盒只要一个简单的恒温装置例如水浴锅等，就能实现反应；反映时间短，在60℃~65℃条件下，一小时内就能完成核酸扩增反应，而PCR反应需要至少两个小时；结果观察也非常简单，试剂盒使用SYBR GreenⅠ荧光染料，这种染料只与双链DNA小沟结合，所以如果反应结果为阳性，肉眼可直接观察到绿色荧光，不像普通PCR方法需要进行凝胶电泳才能观察结果。试剂盒的灵敏性也比普通PCR反应要高，是普通PCR灵敏度的100倍~1000倍。

借助设备现场检测快捷方便

“我们的目的是研制出一种适合现场、基层快速检测的方法。虽然这个试剂盒跟传统方法相比简化了检测步骤，检测试验已经完全可以在现场进行，但由于样品前处理步骤比较繁琐，需要用到一些专业设备，因此如果要得到更灵敏、更准确的结果有条件的情况下最好在有严格无菌条件的实验室里进行。”姜敬哲对试剂盒的情况进行了补充说明。

需要在实验室里操作的主要是从鲍鱼组织中提取DNA的步骤，实验室方法取出的DNA纯度高，用来检测灵敏度也会高；如果在室外，也可使用简便的方法提取DNA。例如将鲍鱼组织剪碎后用碱水（NaOH溶液）浸泡，也可以得到DNA，但这种方法得到的DNA杂质多，纯度低，用来检测病毒就不够灵敏了。除了DNA提取，后续的加样过程如果不是专业的操作很可能会污染，从而影响检测结果的准确性。

“不过，最近有专业的公司推出了LAMP检测配套设备，配合使用前期的核酸提取试剂盒，无需在实验室也无需专业人员操作，从DNA提取到获取灵敏精准的结果，都可以完成了。这种设备适用于大型鲍苗生产企业、渔医渔药公司、饲料企业、水产技术推广站、大型养殖场、水产品加工企业等。”姜敬哲说，“结合我们的试剂盒和该套检测设备，已经完全能够胜任AbSV的现场检测，检测过程仅需2个小时。在病毒浓度很低时就检测出来，让鲍鱼养殖户在早期就对饲料、苗种、亲鲍等进行快速检测，进而就可采取相应措施来降低养殖风险，减小损失。”(来源：《海洋与渔业》)

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